PEG1450溶液（50%）

使用說明書

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

第1版（2016年04月修訂）

[關聯(lián)信息]

PEG1450溶液（50%，無菌）主要由PEG1450（CAS號25322-68-3）、磷酸鹽等組成，其作用原理使能夠改變各類細胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細胞接觸點處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，兩細胞接口處在雙分子層質(zhì)膜的相互親和以及彼此的表面張力作用下，細胞發(fā)生融合。在單克隆抗體制備過程中，PEG1450可作為融合劑，誘導脾細胞和骨髓瘤細胞融合，以獲得生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細胞。

[制品內(nèi)容]

編號	名稱	規(guī)格
IS097-1	PEG1450溶液（50%，無菌）	10ml
IS097-2	PEG1450溶液（50%，無菌）	10*10ml

[儲存及有效期]

4℃保存，有效期6個月。

[使用方法]

單層貼壁細胞

1、將雜交前體細胞以相同數(shù)量（5×10⁴/ml）接種，以適當?shù)呐囵B(yǎng)基培養(yǎng) 細胞，待細胞貼壁擴展至匯合成片（80%匯合率）的密度。

2、吸干培養(yǎng)液，加入 PEG1450溶液（50%，無菌），輕輕轉(zhuǎn)動1min使PEG1450溶液覆蓋所有細胞。

3、靜置1min，加入完全MEM培養(yǎng)液以稀釋PEG1450溶液，吸干凈稀釋的PEG1450溶液，再用5ml MEM培養(yǎng)液洗滌被PEG處理的細胞。

4、吸干凈洗液，加入 MEM培養(yǎng)液，37℃，5% CO2培養(yǎng)過夜。

5、24~48h后先吸去培養(yǎng)液，加入胰酶消化液處理細胞，待細胞消化后吸除胰酶消化液，用HAT選擇培養(yǎng)剔除HPRT和TK缺陷細胞。

6、棄上清液，用補加1×HT和1×A的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞。融合后進行異核體分析，雜交前體細胞在4~5天內(nèi)發(fā)生死亡。  

懸浮細胞

1、將兩種不同親體的細胞各1ml（約為1×10⁷）混勻，離心以沉淀雜交前體細胞，棄上清液，使之剩余約1ml，手指輕彈管底或手搖離心管使兩種細胞混勻并重新懸浮。

2、在離心管中加入1ml PEG1450溶液（50%，無菌），置于37℃水浴，加入提前37℃預熱的含10%胎牛血清的MEM培養(yǎng)液，使PEG1450稀釋并停止作用。

3、離心，棄上清液，加入5ml完全MEM培養(yǎng)液以稀釋PEG1450溶液，吸干凈稀釋的PEG1450溶液。

4、用5ml無血清MEM培養(yǎng)液，手搖離心管重懸細胞(不要破壞細胞)，1000g離心5min，棄上清液，重復1次該步驟。加入含有胎牛血清的HAT選擇培養(yǎng)基，混勻，將細胞懸液用培養(yǎng)液稀釋至5×10⁴/ml，接種于96孔板，37℃ 5% CO2孵育過夜24~48h后選出融合細胞。   

 

[注意事項]

1、應注意無菌操作，避免被微生物污染；  

2、PEG1450溶液較為粘稠時，可37~60℃水浴使其變成溶液；  

3、體外培養(yǎng)的單層貼壁細胞或懸浮細胞均可做融合，但成功概率較大的是單層貼壁細胞； 

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作并嚴格按照實驗室安全操作手冊進行。